应用鲎试验检测黄牛过食精料病内毒素血症的实
应用鲎试验检测黄牛过食精料病内毒素血症的实验研究河南省扶沟县兽医院王书恩河南省畜牧局靳广义河南农业大学牧医系惠参君鲎试验(LimulUSlTe3七)以下为(LT)是检验医学近十几年来才发展起来的一种检测微量内毒素的新技术。1970年Levin首先用于检测病人的内毒素血症，我国自1977年以来不少医疗单位相继应用此项检测技术。此次我们利用这一方法对黄牛过食精料病内毒素血症进行了实验研究。黄牛过食精料病(过食精料综合征)是近年来在临床诊疗中所见到的一种新的内科学疾病。我国兽医工作者在有限的研究中认可了国外的研究结论，中毒机制乃乳酸中毒，故采用了与国外的同称“瘤胃酸中毒”。但是我们在查阅文献中发现国外对该病的毒血症问题仍有两派见解，在Ryan(1964)强凋乳酸酸中毒之后Mullenare[(1966)证甽了来源于瘤胃内的细菌内毒素；Hu— ber(1976)也证明了瘤胃酸中毒时胃内存在内毒素，Doughr[yAndCook曾于1975年对三只羊和一头牛进行了过食谷物的研一24一究，发现血浆样品中有内毒素存在，J．Swenson认为两种见解均可选用，单独的一种理论是不完善的。国内迄今尚未见到本病内毒素中毒的研究报告，为进一步澄清本病是否存在内毒素血症，故特采用LT法对本病的内毒血症进行了实验研究。通过对所设两组(豆料组、谷物组)四头受试黄牛的血浆和瘤胃液(下称胃液)进行lT检测呈现的阳性反应(以下为+)，已初步证实了本病的病理学过程中存在有内毒素中毒，报告如下。材料和方法1．试验动物：供试牛系购自市场的成年役用黄牛4头，试验前经常规检查均属正常。2．过食方法；试验牛经两周正常饲养管理后，分豆、谷两组(每组两头)分别单纯过食粉碎过的大豆、玉米。3．实验方法：本实验按自身对照的方法菌菌菌菌菌母岵母坶母酵义酵酵醉酵丝意丝丝丝丝假要假假假假氏重形带氏滑蒙学植热柔乎也医类假克近季无ⅡⅢⅣYⅦ进行(不专设对照组)。正常饲养结束后检测一次作为健康对照，过食后出现和明显出现综合征时各检测一次。①器材准备与处理所需器材与处理方法均按LT常规方法进行。②采样用消毒处理过的所需用具采集血样及胃液。⑧检测方法采用LT试管法，鲎试剂系厦门鲎试剂厂生产的商品试剂。④被检样品处理血液；常规消毒，采静脉血5一lOm]，置入无热原含肝素64u／0．1ml的小带塞(或胶布封口)试管内(试管为10X75mm)，并随之轻轻侧置3—4次，使肝素和血液混匀。经1000—1500rpm离心10分钟，吸取血浆0．5ml于小试管内，再加无热原水 lml，使血浆为三倍稀释，然后置烧杯中煮沸10分钟，离，C／10分钟，待检。此血液即为加热法除去干扰凝胶形成的抑制物质的血液。胃液：将采集的胃液吸取3mi，经2000—3000rpm离心10分钟，吸上清1．5 ml于小试管内煮沸10分钟，再离心10分钟，待检。⑤操作方法与判定标准采用LT试管法操作方法，照表1。表]三墘l三：判定标准：由于凝胶反应程度的差异，故应根据凝胶形成的状态作分级判定。阴性反应(—)；液体透明无变化。弱阳性(+)：液体粘滞，呈半流动状态1988年(14卷)·第2期阳性(抖)：呈凝胶状态，但倒立试管．时有松动。强阳性(柑)：形成坚实凝胶，倒立试管凝胶不松动。⑥内毒素灭毒(灭活)实验为证实所建立的实验方法是否可靠，依据细菌内毒素过高热可以破坏其生物活性，将经LT检出的血液、胃液(+)样品分别加入小试管各lml，同时设商品内毒素灭毒对照，然后置干烤箱加热200~(2—240~(2两小时灭毒。取出后用无热方法处理过的玻璃棒，将已炭化的样品捣碎，加入无热原水9．2ml，1000 rpm离心，吸上清0．1ml，按上述LT检测方法并设(+)(—)对照进行检测。结果全血。胃液、内毒素三管均呈(—)对照管符合。4．实验中应注意事项①所用器具均应按LT要求消毒处理。②实验用水在进行本实验前应作内毒素测定。⑧实验中如不在防尘罩内操作，也可在密闭清洁的房间进行，保持地面湿润。④煮沸样品时防止沸水飞溅，污染被检物。⑤对每一被检样品应作双排受试，发现不一致者可重复一次。实验结果(见表2)1．两组四例中血液样品除各物组3号牛呈弱(+)反应外，其余均呈强阳性反应；胃液豆、谷组各有一头呈强阳性反应。2．被检样品内毒素含量：按照LT说明书的定量检测方法计算，被检样品中内毒素含量为，=样品最大稀释倍数X鲎试验敏感度。按照这一公式，样品稀释倍数为48“，鲎试剂敏感度为0．1ng／ml，则内毒素含量·为4．8ng／ml。3．实验临床学变化；(只检查T．P． wbc)T39．5℃以上，P100次／分以上，wbG互万以上／mm。一2S一中国兽医杂志表2LT检测结果卜、、午连，ga二÷s释度QGI；卒豆料组谷物组注1234第一次第二次第一次第二次第一次第二次蚺一次第二次胃 qx原液抑制对照_+4K
